Extração e atividade de peroxidase de rabanete (Raphanus sativus) para uso em ensaios imunoenzimáticos
Projeto de pesquisa
- Período
- 2017–2019
- Resumo
- Vários ensaios imunológicos utilizam anticorpos anti-imunoglobulina marcados com enzimas como estratégia para revelar a reação antígeno-anticorpo. Nestes ensaios, o antígeno ou anticorpo é revelado pela ligação com um anticorpo marcado com uma enzima (conjugado) e a clivagem do substrato da enzima é evidenciada utilizando uma substância cromogênica, fluorescente ou luminescente. Desta forma, a detecção do produto da clivagem do substrato pode ser avaliada, visualmente, ou com a ajuda de equipamentos indicando a ocorrência prévia reação antígeno-anticorpo. A enzima mais, frequentemente, utilizada nestes ensaios é a peroxidase de rábano silvestre (HRP), uma planta da família do rabanete. Atualmente, os conjugados marcados com peroxidase são adquiridos apenas de empresas estrangeiras o que, por vezes, leva a dificuldades de importação além do custo elevado. O objetivo deste trabalho será avaliar o potencial da peroxidase extraída de rabanete (Raphanus sativus, Brassicaceae), uma planta bastante adaptada ao solo e clima brasileiros, para produção de conjugados para serem utilizados em ensaios imunoenzimáticos. Para tanto, a peroxidase será extraída do bulbo do rabanete através de maceração e precipitação seletiva e purificada através de cromatografia de exclusão molecular. A peroxidase purificada será caracterizada e estabilizada para posterior conjugação com anticorpos anti-imunoglobulina e avaliação da sua eficiência utilizando os métodos de ELISA, Western Blot e Dot Blot.